NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒微量法

商品介紹：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低溫運輸，-20℃保存

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）（2015藥典） Sabouraud Dextrose Agar 250g

1瓶 C6細(xì)胞株 C6 低溫運輸和保存

大腸桿菌／大腸菌群顯色培養(yǎng)基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)

300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存

500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   常溫保存

0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存

250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   常溫保存

1/2MS培養(yǎng)基 1/2MS Medium 250g

1瓶 U-2 OS-Luc teT-on細(xì)胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低溫運輸和保存

M-肉湯 M-Broth 250g

NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒微量法HDAC5  組蛋白去乙?；?抗體 規(guī)格: 0.1ml

HBXIP  毒X蛋白相互作用蛋白 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PLK1(Thr210)  磷酸化絲/蘇蛋白激Plk1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CHCHD6  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體 規(guī)格: 0.2ml

KMT1C/G9a  組蛋白H3賴9甲基化1C抗體 規(guī)格: 0.2ml

PRL  泌素抗體 規(guī)格: 0.2ml

EDG7/LPA3  溶磷脂酸受體蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

SEPT10  細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADAMTS7(NT)  整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 (N端抗體) 0.1ml

CD177/NB1  嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體 規(guī)格: 0.2ml

LAS2/C18orf54  肺瘤易蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

TIEG1/KLF10  TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體 規(guī)格: 0.2ml