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              皮里陶病毒PCR檢測試劑盒規格

              簡要描述:皮里陶病毒PCR檢測試劑盒規格上海帛科生物相關產品:小鼠分泌型免疫球蛋白A 96TsIgA(Mouse secretory immunoglobulin A) ELISA Kit

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              • 產品型號:50次
              • 廠商性質:經銷商
              • 更新時間:2025-10-22
              • 訪  問  量:1610

              詳細介紹

              原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
               特異性強
              PCR反應的特異性決定因素為:
              ①引物與模板DNA特異正確的結合;
              ②堿基配對原則;
              ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;

              注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

              產品名稱

              英文名稱

              貨號

               皮里陶病毒PCR檢測試劑盒規格

               Pirital virus(PIRV)RTPCR

              BK-P9563

              ?
              實驗過程:
              一、試劑準備
              1. DNA模板
              2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
              3.10×PCR Buffer
              4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
              5.Taq酶
              二、操作步驟
              1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
              10×PCR buffer             5μl
              dNTP mixl                 4μl
              引物1(10pM)               2μl
              引物2(10PM)              2μl
              Taq酶(2U/μl)            1μl
              DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
              ddH2O至               50 μl
              PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
              2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
              3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
              4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

              技術原理:
               DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
                     在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
                     發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。

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